#1
润色专家的意见：Please clarify the timing of the tissue collection processes relative to NSC transplantation and behavioral testing. Was tissue collected from animals who also performed behavioral testing, or did this represent a separate group?
译文：请说明相对于神经干细胞移植和行为测试的组织样本收集的时间。是否从同时进行行为测试的动物身上收集组织样本，或者这些动物是一个单独的群体？
作者可借鉴的问题：检测时间、样本收集时间的确定是保证实验具备可重复性重要因素。NRR鼓励作者在文章中体现时间线图/表或示意图及流程图来解释复杂的研究设计是如何实施及每个步骤或阶段所需的大致时间。
#2
润色专家的意见：Please consider providing brief descriptions of the various AD mouse models mentioned in your introduction, including the mechanism through which they are thought to model AD. Readers who are unfamiliar with this field or with these specific models have no basis for understanding the significance of these models and how well they recapitulate the disease.
译文：请考虑在引言中对文内提到的AD小鼠模型进行简要描述，包括它们模拟AD的机制。不熟悉这一领域或对这些特定模型不熟悉的读者要通过上述介绍去理解这些模型的意义以及它们对疾病的再现程度。?
作者可借鉴的问题：NRR要求涉及体内动物实验的报告要遵循ARRIVE清单，该清单中明确要求在“引言”部分：解释所使用的动物物种和模型如何以及为什么能够实现科学目标，并在适当情况下解释该研究的与人类生物学的相关性。
#3
润色专家的意见：Consider describing the significance of rTg (tau P301L) 4510 mice. What genetic mutations does this mouse feature and how do they recapitulate Alzheimer’s disease?
译文：考虑描述rTg（tau P301L）4510小鼠的意义。这种小鼠有哪些基因突变的特征，它们是如何重现阿尔茨海默病的？?
作者可借鉴的问题：此处是继续了上述关于特定实验模型使用原因的话题。
#4
润色专家的意见：In your description of cell culture methods, sometimes you state that media was added. It is not clear whether you intend to state that some or all of the old media was discarded and replaced with fresh media or whether fresh media was added as a supplement to each dish. Please consider clarifying this point.
译文：在细胞培养方法的描述中，有些描述说明添加了培养基。不清楚是想说部分或全部的旧培养基被丢弃并被替换成新鲜培养基，还是说新鲜培养基被添加到每个培养皿中作为补充。请考虑澄清这一点。?
作者可借鉴的问题：在描述实验方法时，在不赘述的情况下，提供尽可能多的细节，也就是必须提供能让他人重复实验的基本步骤。
#5
润色专家的意见：Do you mean that the mice were paralyzed and anesthetized by cooling them on ice? Please clarify.
译文：通过在冰上冷却小鼠来麻痹和麻醉它们吗？?
作者可借鉴的问题：此处原文为“the newborn mouse was placed on ice for cooling, and being paralyzed and anesthetized, and the brain was separated from the skull and maintained in PBS.”外审专家对新生鼠的麻醉/安乐死问题提出质疑。美国兽医协会指出，啮齿类动物由于受体内一系列激素的影响，胎鼠在子宫内是无意识的，缺氧不会引起任何反应，因此对母鼠进行安乐死后，没有必要单独对胎鼠进行安乐死。对于新生啮齿类动物，他们出生时神经系统发育不成熟，感觉神经在出生后5-7天才发育完成。
因此，新生小鼠可采用如下安乐死方法：
1. 药物注射法：戊巴比妥钠与局麻药，抗惊厥药联合注射可用于新生鼠安乐死。
2. 吸入法：吸入CO2对新生小鼠是有效的，新生动物由于适应了在母体子宫里的缺氧状态，对缺氧有较强的忍耐力，因此作用时间较长。
（CO2窒息法对于新生小鼠而言，是一种“附有条件可接受的安乐死方法（Conditionally acceptable）” ，但要注意：a. 对于新生的啮齿动物，由于其对缺氧的耐受性非常高，所以必须要长时间操作才可以保证死亡。对于新生小鼠，CO2需要处理50min才可以确保死亡，新生大鼠，CO2需要处理35min。b. 使用CO2窒息法时，将有意识的小鼠直接放入100% CO2是不可接受的，会引起动物的不适和痛苦，应该使其先处于诱导期，提供空气或氧气，再持续增加CO2浓度，直到出现呼吸心跳骤停。美国兽医协会要求CO2置换率为每分钟30%-70%容器体积，以确保在引起疼痛之前，动物已失去意识；c. 使用此法时，容器内勿装入过多动物造成拥挤，且勿同时放入不同品种的动物，以免造成动物死亡前的窘迫。）在新生鼠对疼痛刺激无反应时，可采用辅助方法，如：颈椎脱位或斩首。当使用如乙醚、异氟烷等卤代麻醉剂时，必须采用辅助方法(如颈椎脱位、斩首)以避免恢复的可能性。
3. 低温法：出生10天内的新生大小鼠可以采用逐渐降温的方式进行安乐死。需要注意：不可直接将动物直接接触冰或预冷的表面，因为冷的表面会导致组织损伤，引起动物疼痛，另外超过10天的啮齿动物不建议使用低温法。对于无意识的出生5天以内的新生大小鼠可以通过液氮快速冷冻法进行安乐死，超过10天的大小鼠可按照成年动物的安乐死方法进行操作。
注意：不管采用何种方式进行安乐死，最终步骤须确认动物是否已经死亡。操作人员应确保动物无生命指征（胸腔无起伏，且眼睑处泛白，无视觉反应等）。结合动物数量及操作人员心理素质，可采用开腔观察心跳或者将死亡动物装入黄色废弃物袋子后等待30min，之后再次确认是否有存活的动物，若仍有未死亡动物需再次执行安乐死。
#6
润色专家的意见：Please consider indicating what passages were used in the experiments.
译文：请说明实验所使用细胞代数。?
作者可借鉴的问题：一般间充质干细胞建议不超过P10代，做诱导分化实验一般是P4-P7代。若是永生化的细胞或癌症细胞一般不用考虑细胞的代数问题;若是正常细胞或间充质干细胞则需要考虑代数问题，不过这个代数也不是越小越好，需要综合考虑细胞的用量从而决定实验细胞的代数。该文中的描述的是“Extraction of primary NSCs”，需要考虑到细胞代数问题
#7
润色专家的意见：Are these relative to Bregma? Please clarify.
译文：小鼠海马CA1区解剖学定位坐标是相对Bregma而言的吗？?
作者可借鉴的问题：小鼠细胞移植部位海马CA1区解剖学定位依据需要说明，提供相关立体定位图谱。
例如：针对于大鼠：Paxinos G, Watson C (2009) The rat brain in stereotaxic coordinates. San Diego: Elsevier Academic Press.
针对于小鼠：Paxinos G, Franklin KBJ (2013) Paxinos and Franklin"s the mouse brain in stereotaxic coordinates. 4th ed. Boston: Elsevier/Academic Press.
#8
润色专家的意见：Please indicate the number of cells collected, the time, speed, and temperature of centrifugation and the volume of medium used or the final concentration achieved.
Consider indicating what type of container the cells were cultured in and whether they were maintained in suspension or as an adherent culture.
译文：请说明收集的细胞数量，离心的时间、速度和温度，以及使用的培养基体积或达到的最终浓度。考虑说明细胞是在什么类型的容器中培养的，以及它们是在悬浮液中还是作为黏附培养物维持的。?
作者可借鉴的问题：这里指出了神经干细胞的收集、离心、培养需要细节化的程度。
#9
润色专家的意见：Does this differ from the normal complete media? Please indicate what is added to the complete media to make it antibiotic, aside from penicillin/streptomycin.
译文：这与普通的完全培养基有区别吗？请说明除了青霉素/链霉素之外，在完全培养基中还添加了什么以使其具有抗菌性。同时还要说明“培养皿 （dish）”的尺寸。?
作者可借鉴的问题：转染过程中可在培养基中添加抗生素（青霉素-链霉素）。有研究者对多个细胞系在含与不含抗生素的培养基中的转染效果进行了比较，同时评估其转染效率和细胞毒性，结果显示并无差别。不过，某些细胞类型对转染过程敏感或可能出现细胞毒性方面的问题，此时省略抗生素可能会有助于改善结果。对稳定转染而言，转染操作后至少等待48小时以上，再加入选择性抗生素。
#10
润色专家的意见：Please note that, later, the Morris water maze is described as being performed at 4 weeks. Please clarify if all behavioral tests were performed on all animals and in what order, or whether a separate group of animals was used for each test. Because some of these tests last for multiple days, if all tests were performed on all animals, some tests would occur 8 or 9 weeks after transplantation.
译文：请注意，在后面，Morris水迷宫被描述为在4周时进行。请澄清是否所有的行为测试都在所有的动物身上进行，以什么顺序进行，或者是否每项测试都使用单独的一组动物。因为其中一些测试持续了多天，如果所有的测试都在所有的动物身上进行，一些测试将在移植后8或9周进行。
作者可借鉴的问题：要解决此处所提到的关于动物行为学测试的时间及动物只数问题的最好方法，即体现实验时间线图/表或示意图及流程图。同时还需要注意的是，在行为学检测中，除检测流程、技术参数外，还有很多因素会对实验结果产生影响，例如：（1）环境因素。由于啮齿类动物对外界信息比较敏感，因此，外界环境对测试会产生较大的影响。首先，在测试前，实验动物的居住环境要均一稳定，包括每个居住笼内的动物数量，均尽量保证均一，进行操作时，对动物轻拿轻放，任何环境的突然改变均可对动物产生应激刺激，影响行为学的检测。在测试过程中对光线、声音的控制要尤其注意。由于啮齿类动物会留下尿液及粪便在测试仪器中，所产生的气味信号会对接下来的测试产生影响，因此每只动物测试后的清理也十分重要。部分实验检测，由于受到啮齿类动物的活跃性的影响，还要选择活跃度适中的时间段进行行为测试，避免过度活跃或者活跃度下降对行为学测试产生影响。
(2)种属、性别及年龄等因素：在行为学检测中，不同的动物选择，对行为学检测结果均可能产生影响，行为学实验的流程也可能会出现不同的变化。例如，在强迫游泳实验中为了保证稳定的不动基线时间，大鼠需要提前 24 小时进入水中，进行预游泳，而小鼠则无需预先游泳，就足以确保稳定的不动基线时间。在高架十字迷宫实验中，实验人员更多的会选择雄鼠进行实验，雌鼠由于发情周期时雌激素的波动，会影响实验鼠在开臂的停留时间和次数。同样的情况也出现在迷宫实验中，在水迷宫中，雌性鼠的优势较小，而在放射状迷宫中，雄性的优势较小。年龄对实验也有一定的影响，在学习记忆实验中最为明显，衰老鼠本身就存在着明显的学习记忆障，自然衰老大鼠是一个经典的学习记忆障碍模型。因此，在开始设计行为学实验前，审慎地选择实验动物，并选择适当的实验流程是十分必要的。
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